La técnica ELISA es una técnica de inmuno ensayo basada en la especificidad de la reacción antígeno-anticuerpo. Consiste en la detección de un antígeno mediante un anticuerpounido a una enzima capaz de generar un sustratocoloreado medible espectrofotométricamente.
Al ser un método versátil, robusto y simple en su empleo se utiliza en muchos laboratorios de calidad para detectar, sustancias tales como alérgenos alimentarios (Ej. Gluten) o micotoxinas (Ej. Aflatoxinas).
Aunque el procedimiento es rutinario y sencillo, involucra a un gran número de variables, tales como la temperatura, medición de volumen y tiempo. Si no se ajustan correctamente, puede afectar los pasos sucesivos y el resultado de la prueba.
Existe un gran número de kits comerciales basados en el método ELISA. Uno de los aspectos de mayor importancia cuando se diseña el kit es la elección del anticuerpo.
Es de vital importancia conocer las características del antígeno (proteína) que se quiere detectar para poder elegir el anticuerpo más idóneo.
Existen kits que utilizan anticuerpos monoclonales y otros usan anticuerpos policlonales. La elección de un tipo u otro de anticuerpo depende de una gran variedad de aspectos como por ejemplo la disponibilidad del mismo.
También es importante tener en cuenta las características del antígeno a detectar, como por ejemplo el tamaño o incluso las posibles modificaciones que puede presentar. Los anticuerpos policlonales son los anticuerpos de elección frente antígenos variables, porque tienen la capacidad de reconocer múltiples epítopos. Sin embargo son menos específicos que los monoclonales, con lo que presentan una mayor probabilidad de reacciones cruzadas.
Características principales de los anticuerpos:
Anticuerpo monoclonal:
– Es una mezcla homogénea de inmunoglobulinas
– Propiedades idénticas: resultados consistentes y mayor reproducibilidad
– Elevada especificidad: menor reactividad cruzada y menor probabilidad de resultados falsos positivos
– Buena sensibilidad: menor probabilidad de resultados falsos negativos
Anticuerpo policlonal:
– Es una mezcla heterogénea de inmunoglobulinas
– Propiedades variables
– Menor especificidad
– Menor sensibilidad
